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        NEWS新闻资讯

        AAV核酸滴度数字PCR定量试剂盒免费测试!

        AAV核酸滴度定量检测知多少

        随着基因治疗技术日趋完善和临床经验不断积累,监管机构对基因治疗产品的质量控制也愈发严谨慎微。准确的滴度检测是AAV基因治疗药物质控的重要组成部分,也是开展临床研究的前提条件,AAV基因治疗临床试验检测方法汇总如下。

         

        检测项目

        检测方法

        一般理化指标

        外观

        直接检测法

        pH

        电位滴定法

        渗透压

        渗透压测定法

        纯度

        蛋白含量

        SDS-PAGE/银染

        病毒颗粒聚集体

        动态光散射

        空壳率

        透射电镜

        OD260/OD280

        分光光度计法

        宿主DNA残留

        qPCR

        质粒DNA残留

        qPCR

        HKE293/BSA

        ELISA

        核酸酶

        ELISA

        性能

        核酸滴度

        qPCR

        转染效率/感染滴度

        TCID50

        基因表达

        ELISA

        体外活性

         

        安全性

        内毒素

        凝胶限度试验法

        无菌

        培养法

        复制型AAV

        培养法

        其中核酸滴度检测是AAV衣壳中所含基因组作为定量依据,测定的是含有目标基因组的AAV浓度。AAV中包含的基因组是其表达蛋白或RNA的前提,是AAV药物发挥药效的核心和基础。目前AAV核酸滴度检测方法有点杂交法、分光光度计法和qPCR,qPCR作为第二代PCR方法,是各大研究机构药企最广泛采用的定量方法。然而qPCR技术存在较大局限性,如检测结果只是相对标准曲线相对定量,且反应容易qPCR体系中酶或蛋白等成分的干扰,定量结果不够精准等。

         

        ddPCR方法 vs qPCR方法


        • 数字PCRddPCR)被称为第三代PCR技术,与qPCR技术相比具有以下显著优势:
        •  ddPCR无需标准曲线即可对目标分子进行绝对定量;
        • ddPCR有更高的准确度,定量CV值通常小于10%;
        • dPCR抗干扰能力更优,有实验显示,ddPCR检测AAV样本的稳定性高于qPCR技术[1]。


        qPCR方法与数字PCR方法优劣势比较

         

        另一组测试数据显示[2],优化后的qPCR方法中位CV分别为5.35%4.37%,最大值分别为33.2%8.7%,数字PCR三个独立引物探针组的中位CV值为2%或更低,且分布更密集,可见数字PCR方法定量更加准确,重复性更高。

         

        从监管趋势,美国药典细胞和基因治疗标准品章节中明确写道,AAV标准品定量将会使用数字PCR进行定量,可见数字PCR方法在细胞和基因治疗领域绝对定量的突出优势。

         

        达普生物AAV核酸滴度数字PCR定量试剂盒邀请广大客户进行内部测试

         

        综上所述,AAV递送载体的基因治疗产品定量检测中,ddPCR技术受到越来越多业内人士的青睐,为了满足广大客户的需求,达普生物即将推出其自主研发的AAV基因组ddPCR精准定量试剂盒。北京西美杰科技有限公司作为达普生物中国总代理,现携手达普生物开展AAV核酸滴度数字PCR定量试剂盒免费测试活动。

         

        报名方法:即日起至2022615,关注西美杰微信公众号(微信号:xmjsci,发送关键词AAV定量,填写表单,即可获得免费检测机会。每个客户限测5个样本,名额有限,先到先得!

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        西美杰作为专业服务中国生命科学领域16年的供应商,以专业和优质的服务赢得了众多客户的支持和信赖!目前已成为多家世界知名跨国企业中国区研发和生产基地、制药企业与诊断企业以及各大高校与科研院所官方采购平台的指定供应商。其中西美杰代理的达普生物科技有限公司,拥有多个自主研发的仪器平台、全球领先的生物芯片工厂和试剂体系??晒惴河τ糜诓《径考觳?、高通量药物和抗体筛选癌症早期筛查等多个领域。


        达普生物科技有限公司由多位海归博士共同创立。在深圳、嘉兴、香港三地设有研发中心,拥有微流控芯片、仪器及试剂 GMP 厂房。公司专注于将液滴微流控技术应用于精准医学领域,致力于成为集微流控芯片、仪器、试剂的研发和生产于一体的完整解决方案提供商。公司自主研发、生产的两大技术平台:数字 PCR 系统和单细胞组学系统。产品适合应用于癌症早期筛查、靶向治疗、无创产前诊断、病毒定量检测、高通量药物和抗体筛选等领域。

         

         

        参考文献:

        1. Dobnik, David, et al.2019:1570.,Dobnik, David, et al. "Accurate quantification and characterization of adeno-associated viral vectors." Frontiers in microbiology (2019): 1570.
        2. Martin Lock, Mauricio R. Alvira, Shu-Jen Chen, and James M. Wilson. Absolute Determination of Single-Stranded and Self-Complementary Adeno-Associated Viral Vector Genome Titers by Droplet Digital PCR.HUMAN GENE THERAPY METHODS 25:115–125 (April 2014)
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